Pobieranie prezentacji. Proszę czekać

Pobieranie prezentacji. Proszę czekać

Dichroizm kołowy. Zjawisko dichroizmu kołowego (CD) jest rodzajem spektroskopii absorpcyjnej pozwalającej na mierzenie różnic w absorpcji światła lewoskrętnie.

Podobne prezentacje


Prezentacja na temat: "Dichroizm kołowy. Zjawisko dichroizmu kołowego (CD) jest rodzajem spektroskopii absorpcyjnej pozwalającej na mierzenie różnic w absorpcji światła lewoskrętnie."— Zapis prezentacji:

1 Dichroizm kołowy

2 Zjawisko dichroizmu kołowego (CD) jest rodzajem spektroskopii absorpcyjnej pozwalającej na mierzenie różnic w absorpcji światła lewoskrętnie i prawoskrętnie spolaryzowanego kołowo. PODSTAWY

3 Jeśli wektor elektryczny oscyluje wzdłuż jednej linii, wówczas takie fale elektromagnetyczne nazywamy spolaryzowanymi liniowo.

4 Kiedy dwie fale spolaryzowane liniowo w dwóch różnych płaszczyznach, skierowane w tym samym kierunku, różnią się od siebie fazą mamy do czynienia wówczas z polaryzacją kołową

5 Superpozycja dwóch fal o tych samych amplitudach, prostopadłych do siebie, różniące się od siebie fazą (+90 o, - 90 o )

6 Kołowo spolaryzowane fale w medium absorbującym

7 Próka optycznie nieaktywna Próka optycznie aktywna

8 Światło spolaryzowane [ ] (mdeg) – obserwowana eliptyczność [OR]

9 Kołowo spolaryzowane fale w medium absorbującym o właściwościach optycznych

10 Cetonia aurata Światło lewoskrętnie spolaryzowane

11 Chiloloba acuta

12

13 Świetlikowate, robaczki świętojańskie (Lampyridae)

14

15 Całkowite wewnętrzne odbicie

16 Światło lewoskrętnie spolaryzowanle Światło prawoskrętnie spolaryzowanle Światło niespolaryzowanle Dla roztworu o A = 1 A = – ABSORBCJA ŚWIATŁA

17 [ ] (deg*cm 2 *decimol -1 ) – eliptyczność molowa l (cm) – długość ścieżki optycznej c (mol/dm 3 ) – stężenie substancji [ ] (mdeg) – eliptyczność ELIPTYCZNOŚĆ MOLOWA

18 ŚREDNIA ELIPTYCZNOŚĆ MOLOWA NA RESZTĘ AMINOKWASOWĄ RESZTĘ AMINOKWASOWĄ n – ilość aminokwasów w białku

19 Przejścia w obrębie grup amidowych: n * (~220nm) o * (~200nm)

20 Elektryczny dipolowy moment przejścia amidowego n * ( n * ) (~220nm) Elektryczny dipolowy moment przejścia amidowego o * ( o * ) (~200nm)

21 Typowe widma struktur 2-rzędowych białek

22 Poli -Lys in 25 o C: pH 10.8 ( ) pH 11.1 (after 15min in 52 o C) ( ) pH 7.0 (r)

23 Widma Absorpcyjne oraz CD zredukowanego i utlenionego cytochromu c 1

24

25

26

27

28

29 Dehydrogenaza aldehydu 3-fosfoglicerynianiowego w 0.1M NaF pH 7.0 Sybtylizyna w 0.1M NaF pH dopasowane składowe oraz

30

31

32

33

34 N-DCX C- N- C- Model of doublecortin tandem

35 Structure of the N-terminal domain of doublecortin N-term C-term

36 (nm) (deg cm 2 dmol -1 ) x 10 6 Circular dichroism spectra of isolated domains and DCX-tandem of doublecortin Measurements were performed in 50 mM phosphate, 300mM NaCl, pH 7.0, protein concentration: 50 M Tandem N-DCX C-DCX

37 Widmo CD N-DCX of doublecortin 95 o C 21 o C

38 0.1

39 Krzywa denaturacyjna N-DCX (25mM bufor fosforanowy, pH 6.0, H den = 83.9 kcal/mol, T den = o C. Temperature ( o C) CD

40 an+bn[GdmHCl] - intensywność fluorescencji stanu natywnego au+bu[GdmHCl] - intensywność fluorescencji stanu zdenaturowanego m - zależność G den od [GdmHCl] G den - zmiana swobodnej entalpii denaturacji Analiza krzywej denaturacyjnej

41 Measurement was performed in 25mM phosphate pH 7.3, 0.7M GdmHCl, heating rate = 0.25 o C/min, protein conc.= 80 g/ml. The transition was monitored by the increase of fluorescence at 353nm on excitation at 280nm Fraction unfolded Temperature ( o C) T m = 40.5 o C, H vH = 68.9 kcal/mol Denaturacja termiczna FGF

42 Denaturacja chemiczna FGF Fraction unfolded GdmHCl (M) G = 5.53 kcal/mol Gdm½ = 1.13 M m = 4.8 kcal/mol M Measurements were performed in 25mM phosphate pH 7.3, protein concentration = 25 g/ml. The transitions were monitored by the increase of fluorescence at 353nm on excitation at 280nm

43 Thermal unfolding transition of N-DCX and DCX-tandem of doublecortin Measurements were performed in 25mM phosphate, 300mM NaCl, pH 7.0, heating rate = 1 o C/min, protein conc.= 20 g/ml. Transitions were monitored by the changes of the CD signal at 220nm.

44 pH pH titration of N-DCX of doublecortin

45

46 PDB: 1axm Asn 18 Lys 112 Lys 113 Asn 114 Lys 118 Arg 119 Arg 122 Gln 127 Lys 128 FGF-1 - Heparyna fibroblast growth factor

47 Circular dichroism spectra of the wild-type of FGF-1 (), V109I (), H102Y (), L44F (Δ), F108Y () and H21Y () mutants. Widma CD mutantów FGF-1

48 Normalized thermal denaturation curves of the wild-type (), V109I (), H102Y (), L44F (Δ), F108Y (), H21Y () mutants monitored by changes of fluorescence (a) or ellipticity (b). Denaturacja termiczna wariantów FGF-1 ab

49 Parametry denaturacji chemicznej mutantów FGF-1 w obecności heparyny Mutant T m H T m H ( o C) (kcal/mol) ( o C) (kcal/mol) WT V109I F108Y H102Y H21Y L44F Thermal induced unfolding were performed in 25mM phosphate, 1.5M Urea, pH 7.3, scan rate 0.25 o C/min. 10x molar excess of heparin were used. The transitions were monitored by the residual ellipticity at 227 nm

50 Struktura trzeciorzędowa białek

51


Pobierz ppt "Dichroizm kołowy. Zjawisko dichroizmu kołowego (CD) jest rodzajem spektroskopii absorpcyjnej pozwalającej na mierzenie różnic w absorpcji światła lewoskrętnie."

Podobne prezentacje


Reklamy Google