Tworzenie konstruktów ekspresyjnych siRNA
Metody wprowadzania siRNA siRNA Vector [DNA]
Projektowanie short hairpin RNA (shRNA) sekwencja docelowa (19-25nt) pętla (3-9nt) pień
Najczęściej stosowane promotory: H1 – promotor RNAzy P U6 – promotor małego jądrowego RNA CMV rzadziej
Transkrypcja przy udziale RNA polimerazy III: naturalnie występująca polimeraza transkrybuje małe niekodujące RNA transkrypcja zaczyna się w ściśle określonym miejscu terminacja transkrypcji następuje po ciągu tymidynowym (T) 5 transkrypt jest przecinany po drugiej tymidynie transkrypt nie posiada czapeczki 5’ ani ogona poly(A) na końcu 3’
Aleksandra Wesołowska Konferencja „Nowe metody w neurobiologii” 15 grudnia −12 Wykorzystanie małych interferujących RNA do hamowania ekspresji genów w komórkach ssaków – zastosowanie w neurobiologii Gabryelska M. et al. (2005) Interferencja RNA – nowa technologia w leczeniu nowotworów. Neuroskop nr 7, 27-38