Metody diagnostyki zakażeń wirusowych i techniki badań wirusologicznych

Bezpośrednie wykrywanie zakażeń wirusowych przez: Stwierdzenie obecności (izolacja) i identyfikacja wirusa Stwierdzenie obecności wirusowego antygenu Stwierdzenie obecności wirusowego kwasu nukleinowego Wykazanie swoistej funkcji - zakaźności

2.Pośrednie wykrywanie zakażeń wirusowych wykrycie i badanie poziomu specyficznych przeciwciał antywirusowych badanie aktywności mechanizmów odpornosci komórkowej

Izolacja i namnażanie Identyfikacja Wirusa izolowanego in vitro W materiale bezpośrednim

Izolacja i namnażanie wirusów kręgowców

Izolacja i namnażanie wirusów kręgowców Materiał używany do izolacji wirusów: płyny ustrojowe wydaliny i wydzieliny zeskrobiny płyny ze zmian pęcherzowych skrawki śródoperacyjne i bioptaty próbki tkanek pobierane post mortem

2. Sposoby namnażania wirusów: w zwierzętach laboratoryjnych (próba biologiczna) w zarodkach ptaków w hodowlach komórkowych

Namnażanie wirusów w zwierzętach laboratoryjnych Zwierzęta używane do eksperymentów: małe gryzonie (myszy, szczury, chomiki) króliki naczelne (rhesusy i szympansy)

Namnażanie wirusów w zwierzętach laboratoryjnych 2. Drogi podawania materiału zakaźnego: domózgowo dootrzewnowo donosowo dożylnie domięśniowo

Namnażanie wirusów w zarodkach ptaków Zarodki używane do zakażeń: najczęściej stosowane są 7-11 dniowe zarodki kurze 2. Drogi podawania materiału zakaźnego: na błonę kosmówkowo-omoczniową do jamy owodni do woreczka żółtkowego do ciała zarodka (dożylnie, domózgowo)

Objawy wirusowego zakażenia zarodka kury: zmiany w wyglądzie ciała zarodka (przekrwienia, wybroczyny, deformacje) często śmierć zarodka wirusowe ogniska na błonach zarodka zmiany właściwości płynów w jaju (np. mogą nabierać właściwości hemaglutynujących)

Wirusowa hemaglutynacja czyli zlepianie czerwonych krwinek za pośrednictwem wirusa w widoczne gołym okiem agregaty

Namnażanie wirusów w hodowlach komórkowych Rodzaje hodowli stosowanych do namnażania wirusów: pierwotne półciągłe ciągłe Źródła komórek używanych do hodowli komórkowych: tkanki embrionalne tkanki nowotworowe tkanki dojrzałe

Przejawy zakażenia hodowli komórkowej – efekt cytopatyczny CPE Normalna hodowla fibroblastów zarodka kury Przejawy zakażenia hodowli komórkowej – efekt cytopatyczny CPE rozsiany syncytialny miejscowy (łysinka)

Identyfikacja wirusa

W materiale bezpośrednim Izolowanego in vitro

Badanie mikroskopowe mikroskop świetlny – ciałka wtrętowe cytoplazmatyczne i wewnątrzjądrowe mikroskop elektronowy - wiriony c. w. cytoplazmatyczne c. w. wewnątrzjądrowe

S Wewnątrzjądrowe ciałka wtrętowe w komórkach linii ED (skóry konia) podczas zakażenia herpeswirusem typu 2 (EHV-2)

Filo Corona Pox Rhabdo Hepadna Papilloma Orthomyxo

W skrawkach mrożeniowych Immunofluorescencja W skrawkach mrożeniowych

W zakażonych hodowlach komórkowych Techniki immunoenzymatyczne Immunofluorescencja W zakażonych hodowlach komórkowych Techniki immunoenzymatyczne

Wykrywanie i analiza kwasów nukleinowych PCR hybrydyzacja analiza restrykcyjna

Nested PCR

In situ w skrawku histopatologicznym Hybrydyzacja In situ w skrawku histopatologicznym

In situ w hodowli komórkowej Hybrydyzacja In situ w hodowli komórkowej

Hybrydyzacja Na membranie

Analiza restrykcyjna