Organizacja i ekspresja genomu eukariotycznego Katarzyna Kozioł Magdalena Machowska Katarzyna Piekarowicz (Pracownia Białek Jądrowych, p.41c, e-mail: koziol@ibmb.uni.wroc.pl)

Cel ćwiczeń: Analiza procesu dekondensacji chromatyny Analiza procesu wiązania białek do chromatyny podczas dekondensacji Przygotowanie preparatów umożliwiających analizę morfologii jąder komórkowych w różnych stadiach rozwojowych muszki owocowej embrion larwa poczwarka jajniki Analiza morfologii jąder komórkowych w różnych fazach cyklu komórkowego w komórkach w hodowlach komórkowych

METODA IN VITRO NUCLEAR ASSEMBLY - ANALIZA DEKONDENSACJI CHROMATYNY ORGANIZACJA CHROMATYNY REPLIKACJA BADANIE MITOZY WPŁYW WYBRANYCH BIAŁEK NA PROCESY DEKONDENSACJI I ODTWARZANIA OTOCZKI -chromatyna -ekstrakt - energia ODTWARZANIE JĄDER KOM.: - ekstrakt z oocytów Xenopus laevis (żaba szponiasta) - LSS - DSP odbłoniona chromatyna ze spermy Xenopus (demembranated sperm chromatin) - inhibitor coctail - energy mix: ATP, PC (fosforan kreatyniny), PCKinase

Analiza procesu dekondensacji chromatyny

Odtwarzanie jąder komórkowych (chromatyna i otoczka) http://www.jove.com/details.php?id=908

Populacje pęcherzyków mitotycznych NEP-B i NEP-A Widoczne pęcherzyki błonowe asocjujące z chromatyną Widoczne prekursory porów i kompletne kompleksy porowe.

Budowa otoczki jądrowej

-wpływają na replikację, transkrypcję, splicing LAMINY -wraz z innymi białkami otoczki jądrowej tworzą dynamiczny szkielet białkowy zapewniający mechaniczną podporę otoczki jądrowej -kontrolują umiejscowienie kompleksów porowych w obrębie otoczki jądrowej -regulują organizację przestrzenną chromatyny, stanowią miejsce kotwiczenia domen chromatynowych -wpływają na replikację, transkrypcję, splicing -zaangażowane są w procesy starzenia, różnicowania i apoptozy Molecular Biology of the Cell Alberts,B i wsp., (1994) TYPY LAMIN (ludzkie) -B: (LMNB1) - B1 (LMNB2) –B2, B3 -A/C (LMNA) , A, C,C2, A10

Wpływ emeryny na odtwarzanie struktury otoczki jądrowej in vitro

Przygotowanie preparatów umożliwiających analizę morfologii jąder komórkowych w różnych stadiach rozwojowych muszki owocowej

Dymorfizm płciowy u Drosophila melanogaster

Budowa jajników u Drosophila melanogaster Jajniki Cewka jajnikowa (owariola)

Owariole i komory jajowe muszki owocowej

Analiza dystrybucji obu typów lamin w embrionach D Analiza dystrybucji obu typów lamin w embrionach D.melanogaster przy użyciu mikroskopii konfokalnej.

Analiza morfologii jąder komórkowych w różnych fazach cyklu komórkowego

Formowanie wrzeciona podziałowego The Cell A Molecular Approach Geoffrey M. Cooper Boston University Second Edition Sinauer Associates, Inc., ISBN 0-87893-106-62000

Do zobaczenia na ćwiczeniach. Dziękujemy za uwagę! Do zobaczenia na ćwiczeniach. Zaliczenie: - kolokwium ( termin do uzgodnienia) praca na ćwiczeniach obecność