Pobierz prezentację
Pobieranie prezentacji. Proszę czekać
1
Spektrometria mas
2
ZNACZĄCE POSTACIE SPEKTROMETRII MAS
Ion Chemistry Francis William Aston ( ) Cambridge University, Great Britain; Nobel Prize in Chemistry 1922 1st MS Joseph John Thomson ( ) Cambridge University, Great Britain; Nobel Prize in Physics 1906 Ion Trap Technique Wolfgang Paul ( ) University of Bonn, Germany; Nobel Prize in Physics 1989 ESI of Biomolecules John B. Fenn (1917) Virginia Commonwealth University, Richmond, Virginia Fragmentation Mechanisms Fred W. McLafferty (1923) Cornell University Ithaca, New York Mechanisms and Applications R. Graham Cooks (1941) Department of Chemistry, Purdue University West Lafayette, Indiana Peptide Sequencing using MS Klaus Biemann (1926) MIT, Cambridge, Massachusetts MALDI Franz Hillenkamp (1936) University of Münster, Germany Mechanism of MALDI & ESI Michael Karas (1952) University of Frankfurt, Germany
3
Joseph Thompson: IZOTOPY HELU
1911
4
ZASADA POWSTAWANIA WIDMA MAS
Droga jonów w polu elektrycznym i magnetycznym: rezultat działających sił: Siła pola magnetycznego (Fm) Siła odśrodkowa (Fc) Energia kinetyczna w polu elektrycznym (E) Fm = Bev B = natężenie pola magnetycznego Fc = mv2/r v = prędkość cząstki Ek = eU = ½ mv2 e = ładunek jonu m = masa cząstki r = promień toru U = natężenie pola elektrycznego Ek = energia kinetyczna cząstki
5
ZASADA POWSTAWANIA WIDMA MAS
Fm = Fc Bev = mv2/r v = Ber/m
6
WIDMO MASOWE Stosunek masy jonu do jego ładunku w funkcji
intensywności sygnału Intensywność m/z 1 Th = 1 Dalton/liczbę ładunków
7
MASY ATOMOWE - IZOTOPY Węgiel 12C 12.0000* 98.89 13C 13.0033 1.11
Symbol Masa atomowa Zawartość izotopu, % Węgiel C * 13C Chlor Cl 37Cl * Masa uznana jako dokładnie 12 przez UPAC M(C) = ( ) ( ) = M(Cl) = ( ) ( ) =
8
SKŁAD IZOTOPOWY NIEKTÓRYCH PIERWIASTKÓW
12C (std) 98.89 13C 14N 15N 16O 17O 18O
9
SKŁAD IZOTOPOWY NIEKTÓRYCH PIERWIASTKÓW
19F 28Si 29Si 30Si 32S 33S 34S 35Cl 37Cl
10
SKŁAD IZOTOPOWY NIEKTÓRYCH PIERWIASTKÓW
79Br 81Br 126I M(Br): [% 79Br x ] + [% 81Br x ] [50.52 x ] + [49.48 x ] =
11
SKŁAD IZOTOPOWY NIEKTÓRYCH
PIERWIASTKÓW
12
SKŁAD IZOTOPOWY – OBWIEDNIA IZOTOPOWA
C1 C10 C100 m/z R.I. X X X X m/z R.I. X X m/z R.I. X X m/z
13
MASA CZĄSTECZKOWA MASA MONOIZOTOPOWA
Masa cząsteczkowa respiryny C33H40N2O9 Masy atomowe: Masy izotopów: C: 33 x = C: 33 x = H: 40 x = H: 40 x = N: 2 x = N: 2 x = O: 9 x = O: 9 x =
14
PORÓWNANIE PROFILU IZOTOPOWEGO
WIDMA ZMIERZONEGO I OBLICZONEGO
15
WIDMO MAS A STRUKTURA MOLEKUŁY
16
Jonizacja cząsteczek wiązką elektronów
RODZAJE JONIZACJI Miękka Jonizacja cząsteczek wiązką elektronów Twarda
17
METODY JONIZACJI
18
WIDMO EI KWASU OCTOWEGO
19
ZALEŻNOŚĆ STOPNIA FRAGMENTACJI
OD SIŁY POLA ELEKTRYCZNEGO
20
ESI 5kV LC Desolvation & Fission Droplet Formation Gas Phase Ion
Orifice Plate LC 5kV Desolvation & Fission Nebulizing Gas Droplet Formation To MS Gas Phase Ion Generation Drying Gas Curtain Plate Curtain Gas
21
REDUKCJA KROPLI I POWSTAWANIE JONÓW
22
ESI Tryb jonów dodatnich Tryb jonów ujemnych [M+H]+ [M-H]-
[M+nH]n+ i [M+Na+]+ [M-nH]n- i [M+I-]-
23
ESI Potrójny Kwadrupol (QqQ) 2 kwadrupole filtrujące masy i jedna cela zderzeń. Pułapka jonowa (IT) Pojedyncza pułapka działa jako analizator mas i cela zderzeń. Hybrydy (np. LIT) Instrument wygląda jaki QqQ ale jeden kwadrupol pełni rolę pułapki jonów.
24
POTRÓJNY KWADRUPOL Akumulacja jonów Q0 Q1 Q2 Q3 Filtrowanie jonów
Cela zderzeń Filtrowanie jonów
25
Q2 fragmentuje wyselkcjonowany jon.
POTRÓJNY KWADRUPOL Ion accumulation Q0 Q1 Q2 Q3 Precursor ion selection Fragmentation N2 CAD Gas Q1 selkcjonuje [M+H]+ Q2 fragmentuje wyselkcjonowany jon. Q3 filtruje i monitoruje tylko wybrany jon.
26
WIDMO ESI ZWIĄZKU O NISKIEJ MASIE
27
WIDMO ESI SYNTETYCZNEGO
OLIGONUKLEOTYDU
28
WIDMO ESI KOMPLEKSÓW 18-C-6
Z KATIONAMI LITOWCÓW
29
WIDMO ESI PEPTYDU O MASIE 16952,20 Da
30
ROZDZIELCZOŚĆ SPEKTROMETRU MAS
32
FRAGMENTACJA ŁAŃCUCHA PEPTYDOWEGO
33
FRAGMENTACJA ŁAŃCUCHA PEPTYDOWEGO
b2-H2O b3- NH3 a2 b2 a3 b3 HO NH3+ | | R O R2 O R O R4 | || | || | || | H -- N --- C --- C --- N --- C --- C --- N --- C --- C --- N --- C -- COOH | | | | | | | H H H H H H H y3 y2 y1 y2 - NH3 y3 -H2O
34
FRAGMENTACJA ŁAŃCUCHA PEPTYDOWEGO
35
IDENTYFIKACJA PEPTYDÓW/BIAŁEK PRZY UŻYCIU MS/MS
G V D L K Identyfikacja peptydu MS/MS mass Intensity mass
36
TANDEM MS
37
Peptide Mass Fingerprinting (PMF)
„ODCISK PALCA” W MS Peptide Mass Fingerprinting (PMF)
38
PROTEOMIKA - MS Trypsin + Gel punch p53 Trx G6PDH
39
ENZYMATYCZNA HYDROLIZA BIAŁEK DO PEPTYDÓW
GTDIMR HPLC do MS/MS PAKID MPSERGTDIMRPAKID...... MPSER …… …… PEPTYDY (tryptic peptides) BIAŁKO
40
BIBLIOTEKA PEPTYDÓW TRYPTYCZNYCH
Sekwencja Masa (M+H) Peptydy trypt. >Białko 1 acedfhsakdfqea sdfpkivtmeeewe ndadnfekqwfe >Białko 2 acekdfhsadfqea nkdadnfeqwfe >Białko 3 MASMGTLAFD EYGRPFLIIK DQDRKSRLMG LEALKSHIM A AKAVANTMRT SLGPNGLD KMMVDKDGDVTV TNDGAT ILSM MDVDHQIAKL MVELS KSQDD EIGDGTTGVV VLAG ALLEEAEQLLDRGIHP IRIAD acedfhsak dfgeasdfpk ivtmeeewendadnfek gwfe acek dfhsadfgeasdfpk ivtmeeewenk dadnfeqwfe SQDDEIGDGTTGVVVLAGALLEEAEQLLDR2 DGDVTVTNDGATILSMMDVD HQIAK MASMGTLAFDEYGRPFLIIK2 TSLGPNGLDK LMGLEALK LMVELSK AVANTMR SHIMAAK GIHPIR MMVDK DQDR
41
TANDEM MS MS LC Ion Source MS-1 collision cell MS-2 MS/MS
42
ANALIZA DANYCH S e kwencja MS/MS instrument Analiza przy użyciu baz danych
43
PMF online Mascot ProFound MOWSE PeptideSearch PeptIdent
ProFound MOWSE PeptideSearch PeptIdent
Podobne prezentacje
© 2024 SlidePlayer.pl Inc.
All rights reserved.