Podręczniki Biologia molekularna (seria Krótkie wykłady) red. P. Turner, A.McLennan, A. Bates, M. White; wyd.3. PWN, 2011. Biotechnologia Roślin red. Stefan Malepszy, PWN, 2009. Podstawy Biotechnologii red. C. Ratledge, B. Kristiansen, PWN, 2011 Basic Methods In Molecular Biology L. Davis, M. Kuehl, J. Battey, McGraw-Hill Professional; 2nd edition (October 1, 1995) Biochemistry and Molecular Biology of Plants Edited by Bob Buchanan, Wilhelm Gruissem and Russell L. Jones Wiley;March 2002

Podsumowanie- wykład1 Podstawowe metody stosowane w biologii molekularnej roślin Cechy organizmu modelowego Przykłady roślin modelowych Arabidopsis thaliana i ekotypy wykorzystywane w laboratoriach Sposoby identyfikacji mutantów u Arabidopsis Różne sposoby uprawy Arabidopsis (pożwyki płynne, podłoża stałe, płytki z agarem ) Brachypodium distachyon i ryż jako modelowe trawy Antirrhinum majus – model w organizacji kwiatu o symetrii grzbiecistej

Arabidopsis thaliana - model wśród dwuliściennych Mały jednoroczny chwast z rodziny Brassicaceae (krzyżowe); 15-20 cm wys. Wytwarza dużą liczbę nasion/roślinę. Diploid (2N), mały genom 125 Mbp DNA Krótki cykl życiowy (ok. 6-8 tygodni „od nasiona do nasiona”) Samopylny Łatwy do indukowania mutacji Od wielu lat Arabidopsis thaliana jest wykorzystywana jako roślina modelowa w genetyce roślin wyższych. Podstawą wykorzystania rzodkiewnika jako organizmu modelowego są niewielkie rozmiary zsekewncjowanego już genomu, jest rośliną małą, pospolitą i tanią w hodowli, a jej cykl zamyka się w 6-8 tygodniach.

Arabidopsis - how to grow not to kill http://arabidopsis.info/information/kill.pdf Brak wymaganych suplementów w pożywce (witamin, hormonów, aminokwasów) Zbyt wysoka temperatura w pokoju hodowlanym (<30°C) Pasożyty (owady, grzyby) Zbyt długi czas wernalizacji w lodówce (optimum 24-48h) Zbyt intensywne nawadnianie (doesn’t get on well with algae) Termin przydatności nasion (best before 1901) Zebranie nasion niedojrzałych (If it’s green, it’s not ready!) Zbyt długi czas płukania nasion w mieszaninie sterylizacyjnej (ACE) Zbyt silne stężenie alkoholu w mieszaninie sterylizacyjnej powyżej 95% Zbyt głęboko wysiane nasiona do gleby Temp.18-22C; 100-300 µmol fotonów m-2s-1; wilgotność 50-70 %; 16 h światło, 8 h ciemność ;

Hodowla rzodkiewnika na pożywkach płynnych Pożywka Murashige & Skoog: (1x lub 0,5x) podstawowa zmodyfikowana np. bez N + sacharoza + MES pH= 5,5-5,7 Pożywka azotanowa 7 mM NO3 wg. P. Tocquin i in., BMC Plant Biology, 2003. pH= 5,5-5,7 1mM Ca(NO3)2 x 4H2O 0,13 mM NH4H2PO4 5 mM KNO3 0,5 mM MgSO4 x 7 H2O 22,3 M EDTA 31,3 M NaOH 29,3 M NH4NO3 r-r mikroelementy •22,4 mM cytrynian Fe •9,68 mM H3BO3 •2,03 mM MnCl2 •0,314 mM ZnSO4 x 7 H2O •0,21 mM CuSO4 x 5 H2O •0,139 mM MoO3 20 mg •0,0859 mM Co(NO3)2