Mikroskopia i techniki wizualizacji

Prezentacja na temat: "Mikroskopia i techniki wizualizacji"— Zapis prezentacji:

1 Mikroskopia i techniki wizualizacji
Milena Damulewicz Zakład Cytologii i Histologii Uniwersytet Jagielloński

2

3

4

5 http://www. microscopy. fsu

6 optyka

7 http://www. microscopy. fsu

8

9 http://www. microscopy. fsu
ABERRACJA SFERYCZNA Wiązki światła symetryczne względem osi optycznej i różnie od niej oddalone, po przejściu przez układ nie przecinają się w jednym punkcie

10 ABERRACJA CHROMATYCZNA
ABERRACJA CHROMATYCZNA Wada soczewkowych układów optycznych spowodowana zależnością współczynnika załamania światła materiału soczewek od długości fali świetlnej; przejawia się w powstawaniu na obrazie barwnych obwódek wskutek rozszczepienia światła przy załamaniu w materiale soczewki.

11 http://www. microscopy. fsu. edu/primer/java/aberrations/coma/index
KOMA Wiązka promieni świetlnych, wychodząca z punktu położonego poza osią optyczną, tworzy po przejściu przez układ plamkę w kształcie przecinka; ujawnia się tym bardziej, im dalej punkt leży od osi.

12 http://www. microscopy. fsu
Astygmatyzm Obraz punktu położonego poza osią optyczną układu nie tworzy punktu, lecz dwie linie ogniskowe, z których jedna leży w płaszczyźnie padania, obejmującej oś soczewki i  przedmiot punktowy, a druga jest do tej płaszczyzny prostopadła.

13 http://www. microscopy. fsu

14 http://www. microscopy. fsu

15

16 Zdolność rozdzielcza mikroskopu
NA NA = n sinm

17

18

19 L – mechaniczna długość tubusa
Powiększenie mikroskopu L D M = f1 f2 L – mechaniczna długość tubusa D – odległość dobrego widzenia (250 mm) f1 – ogniskowa obiektywu f2 – ogniskowa okularu

20 Przysłona aperturowa

21 Typy mikroskopów Mikroskop świetlny Fluorescencyjny Elektronowy
Jasnego pola Ciemnego pola Kontrastu fazowego Interferencyjny Polaryzacyjny Fluorescencyjny Elektronowy Skaningowy transmisyjny Konfokalny

22 Mikroskop jasnego i ciemnego pola

23 Mikroskop interferencyjny
Kontrast Nomarskiego Analiza ilościowa suchej masy Określenie grubości skrawków Optyczne „wybarwienie” Plastyczny obraz

24 Mikroskop fluorescencyjny
Filtr wzbudzenia Filtr absorbujący Filtr barierowy

25 Mikroskop konfokalny

26 Mikroskop elektronowy skaningowy

27 TEM

28 Metody wizualizacji Barwienie przyżyciowe Barwienie histologiczne
Barwienie histochemiczne Barwienie immunohistochemiczne Barwienie fluorescencyjne Barwienie immunofluorescencyjne Barwienie radioimmunoizotopowe Barwienie enzymatyczne GFP

29 Przygotowanie materiału
Preparaty parafinowe Utrwalenie tkanek – formalina Odwodnienie Przepojenie Zatopienie w parafinie Skrawanie Odparafinowanie Nawodnienie barwienie Preparaty mrożeniowe Krioprotekcja Utrwalenie w ciekłym azocie Skrawanie barwienie

30 Barwienie histologiczne
Kontrastowanie struktur komórkowych Hematoksylina + eozyna fiolet krystaliczny

31 Barwienie histochemiczne
Uwidocznienie określonych substancji w komórce PAS = z odczynnikiem Schiffa – wykrywa cukry

32 Barwienie immuno- Przeciwciało drugorzędowe znacznik Przeciwciało
Przeciwciało pierwszorzędowe

33 Barwienie immunohistochemiczne
Wykrywanie antygenów za pomocą znakowanych przeciwciał

34 Barwienie radioimmunoizotopowe
Tryt Jod 125 Fosfor 32 Fosfor 33 Siarka35 Węgiel 14

35 Barwienie enzymatyczne
Peroksydaza chrzanowa Alkaliczna fosfataza

36 Barwienie fluorescencyjne
DiIC18 – błona komórkowa Hoechst –DNA – niebieskie   DAPI Oranż akrydyny – DNA zielone; RNA pomarańczowe

37 Barwienie immunofluorescencyjne
FITC Texas red Cy3 rodamina

38 GFP

39 Oświetlenie Kohlera Kondensor przesuwamy pod stolik
Ustawiamy ostro widziany preparat Zamykamy przesłonę polową i aperturową Ustawiamy na środku plamkę światła Ustawiamy ostre brzegi plamki Rozszerzamy plamkę do granic pola widzenia Ustawiamy włókna żarówki centralnie